分光光度法

分光光度法是一种长期以来被认为是成熟的技术,仪器的进步往往侧重于微调技术细节,例如光源或探测器,而不改变基本技术。今天,整个工业界和学术界的生命科学实验室正在不断开发出需要更少材料进行分析的方法。只需极少量样品即可进行测量的质量控制工具**关重要。2000年初,**台微量体积分光光度计Thermo Scientific NanoDrop 1000的推出满足了这一需求,使实验室能够进行质量控制检查,样品体积小**1 uL。从那时起,NanoDrop™ 产品已整合到整个科学界的24,000多个站点中。

NanoDrop技术是一种获得**的样品保留系统,它使用固有的表面张力在测量过程中捕获并保持两个光学基座之间的少量样品。由于没有保持样品所需的比色皿或毛细管容纳装置,因此路径长度由在两个光学表面之间形成的液体样品柱的距离确定。新推出的NanoDrop 2000和2000c型号的自动测距功能可自动优化任何给定样品的路径长度,从而产生广泛的动态范围(dsDNA为2 ng / uL**15,000 ng / uL),基本上不需要进行稀释。

应用范围从使用微阵列和定量RT-PCR的表达研究到用于器官移植的HLA分型。尽管NanoDrop分光光度计是完整的紫外 - 可见光仪器,可以测量吸收该范围内光线的任何常见生物分子,但**常见的是DNA,RNA和蛋白质的定量分析。NanoDrop产品的科学营销经理Philippe Desjardins表示,“对NanoDrop技术的一个重大误解是它专门用于样品有限的应用,例如激光捕获显微切割,穿刺活检和法医学。虽然NanoDrop是这种情况的一种支持技术,但我们绝大多数仪器都用于在样本充足时进行测量。“这是因为NanoDrop经常被集成到更大规模的工作流程中,以提高效率而不影响准确性。事实上,NanoDrop 2000c型号既有微量体积基座系统,也有比色皿选项。“为什么我们把比色杯放进系统?”Desjardins说。“在某些特殊情况下,比色皿实际上是**,例如挥发性样品,微生物细胞培养或动力学研究,使其成为理想的二合一紧凑型分光光度计。”

NanoDrop 8000是原始NanoDrop微量体积分光光度计的八个样本版本,并且越来越多地被集成到生物生产设施中以提高效率。Desjardins评论说:“例如,生产用于人类使用的重组蛋白质和抗体的蛋白质设施先前需要从生产批次中抽取比色杯体积的材料,并将其带到单独的实验室进行质量保证分析。现在,使用NanoDrop 8000分光光度计,您可以在生产现场实时进行质量保证检查。样品可以在线绘制并进行测试,没有时间延迟。此外,样品不会受到稀释的影响,因此真正代表了生产批次。这为测试结果提供了更大的信心,

使用路径长度具有另一个优点,因为不需要建立标准浓度曲线来校准仪器。这通常通过扫描具有不同浓度的多个样品来完成。C Technologies Inc.的SoloVPE,使用降低到样品中的光纤探针来获取吸光度读数。在这种情况下,光路是垂直的,从探头穿过比色皿的底部。然后可以以5微米的增量降低探针,在每个阶段读取吸光度或扫描。较旧的技术依赖于改变比尔定律中的浓度变量,引入稀释误差,并提出关于吸光度值是否在比尔定律的线性范围内的问题。相反,通过改变路径长度,获得吸光度与路径长度的关系图,其斜率用于计算浓度。这被称为斜率光谱学。仪器自动调整路径长度,直到确定样品的线性范围,无需稀释样品。与Nanodrop仪器一样,SoloVPE使用垂直光束和可调光源在光源和探测器之间创建可调节空间。然而,主要区别在于使用斜率光谱法,SoloVPE不依赖于**吸光度,并且可以使用相对吸光度变化进行测量。

C Technologies公司总裁克雷格·哈里森说:“我们做的是相当于数千个比色皿....这是一种非常复杂而简单的方法来获得准确的测量...我们经常得到的评论是'为什么以前没有人这样做过?' 并且'哇,这太简单了。'“

Picodrop开发了一种不同的微量分光光度法。Picodrop分光光度计使用p10移液管**作为样品体积的容器。光线直接穿过**,**仍然附着在移液器上。然后以相同的方式取出样品并转移到该程序的下一步骤。Picodrop的创始人兼**执行官Jonathan Redfern说:“我们的主要优势是完全回收样品并完全控制样品。我们认为它更容易使用。“

Picodrop对于小**1**2 ul的样品非常有效,或者样品太弱而无法进一步稀释。除了常规的分光光度法应用,如核酸或蛋白质定量,小体积提供了新的应用。例如,Picodrop扫描可用于快速确定微阵列实验中两种不同颜色染料的比例,并在必要时进行校正。

由于样品不接触仪器内部的任何表面,因此Picodrop可用于需要污染的应用,例如细胞培养样品或放射性样品。除了移液器吸头壁形成的屏障外,Picodrop的电子移液器还会将空气吸入吸头底部,以形成额外的缓冲空间,防止污染。与Gilson合作开发的一种名为Seadragon的新型液体处理平台将Picodrop的兼容性扩展到自动化平台。

大多数人都知道微体积分光光度计,但可能不知道这些设备与传统的分光光度计相比是有利的。在减小比色杯的尺寸或完全消除比色杯方面没有精度损失,并且这些新的小型装置即使在非常大规模的过程中也是有用的。