如何知道是时候要更换你的HPLC色谱柱



没有比在以前用于类似应用程序的色谱柱上运行珍贵的样品更令人沮丧的了,只是发现它的性能很差并且实验受到损害。或者以花费数月时间进行优化的典型方法来运行列,以得出无法解释的数据总数。至少在第二种情况下,您可以更轻松地将其缩小到HPLC和/或色谱柱。

一些技巧将有助于对色谱柱进行故障排除,以了解是否可以对其进行翻新或是否需要更换。

我们将在这里检查反相列:

上次使用(或使用)后是否已清洗色谱柱? 反相色谱柱通常存储在可混溶的有机溶剂(例如60-80%的甲醇-水)中。这与所用的大多数流动相兼容,但是,**好使用20-30 mL流动相的强溶剂(例如甲醇或乙腈)洗涤色谱柱。切换到正在运行的流动相并监控流的基线–压力和吸收率是否恒定?

在运行之前,色谱柱是否已正确平衡? 对于典型的方法,10倍的柱体积足以平衡,尽管不会损害更大的体积,并且该方法可能需要这样做。可以通过以下简单关系估算色谱柱体积:Vm≈0.1 L-对于直径为4.6 mm的色谱柱,其中V为体积,L为色谱柱长度

色谱柱是否足够“润湿”? C18色谱柱填充有孔径为6-15 nm的颗粒。C18表面粘结在孔隙内部,很少在颗粒的外表面。在正常运行期间,水-有机流动相会充分润湿毛孔,以使后续的有机溶液能够以一致的方式相互作用。如果用100%的水洗涤或平衡色谱柱,则疏水孔会排斥亲水性水-无需大量洗涤或平衡水即可改变。此外,将有机溶剂加回到流动相中时,用色谱柱重新平衡较慢。

色谱柱是否已适当调节? 尽管对于新一代的高纯度二氧化硅基色谱柱而言,这并不是什么大问题,但较早的色谱柱可能需要在样品沉降之前中断几次进样,以提供恒定的保留时间和分析物的峰面积。对于较旧的色谱柱尤其如此,这些色谱柱在转换方法期间已通过大量清洁进行了改造。当然,对于较旧年份的新列也是如此。

柱子是否被不溶物“堵塞”? 可能会提出这样的论点,即样品和/或分析物不溶于流动相的有机溶剂。两个快速测试可以包括外部溶解度实验和/或在运行之前对样品进行稀释。尽管进行了洗涤和平衡程序,但仍有可能色谱柱中含有不溶物或污染物,这会对性能产生负面影响。**步是使用与您的流动相相容的强溶剂进行大量洗涤。在极端情况下,可以逆向流动以从塔顶向后冲洗不溶物。但是,应谨慎使用,因为床的完整性会影响色谱柱的性能。

所有这些问题都将影响色谱柱的性能,如通过运行校准样品,监控压力水平和稠度以及观察任何吸光度波动即可证明。如果您不愿使用Akums Razor,那么您认为**简单的解决方案通常是正确的选择-升级和更换色谱柱的时间。如果性能问题仍然存在,则可能是时候对泵和/或吸光度检测器进行故障诊断了。