了解有关紫外线吸收蛋白质

检测蛋白质和蛋白质晶体的主要方法有两种。一种是成像或获取蛋白质固有荧光的光谱。第二个是成像或获取蛋白质的吸收光谱。在这两种中,第二种更好,特别是用于蛋白质晶体的鉴定和分析。

溶液中蛋白质晶体的紫外吸收图像

1.速度

蛋白质通常在280 nm处强烈吸收。这意味着可以快速获取图像和光谱。另一方面,与之相比,蛋白质的固有荧光较弱,这意味着暴露时间**较长。 

2.破坏紫外线(UV)

荧光弱意味着蛋白质样品**长时间暴露在有害的紫外线下。吸光度成像和吸收光谱学快速完成,因此紫外线照射时间短且受限制。

3.荧光所需的色氨酸

色氨酸残基在发出荧光的氨基酸中具有**高的荧光量子产率。如果它没有以足够高的浓度存在,则不会检测到荧光。通过吸收,色氨酸只是吸收紫外线的许多氨基酸中的一种。另外,氨基酸之间的肽键也会在深紫外线中吸收!

4.荧光可以淬灭

杂质,其他氨基酸甚至蛋白质的结构都可能潜在地抑制已经微弱发射的色氨酸残基的荧光。 

5.污染物易于区分

通过紫外线吸收成像和吸收光谱,可以轻松,快速地将盐晶体和其他污染物与蛋白质晶体区分开。

6.蛋白质浓度的测定

紫外线吸收可用于确定晶体中蛋白质的浓度。

7. DNA和RNA分析

紫外线吸收可用于分析DNA和RNA样品和晶体,而荧光则不能,因为DNA和RNA都不发荧光。

8.确定DNA和RNA样品的污染

蛋白质对DNA或RNA晶体的污染可以使用吸收方法以无损方式快速安全地测量,而吸收方法是使用蛋白质荧光无法实现的。