分光光度计的测量原理

分光光度计使用的基本测量原理相对简单,易于理解。我将解释该原理,因为它分别适用于固体样品和溶液样品。

(1)固体样品

如图1所示,**先在不设置样品的情况下测量测量光束的强度I 0。然后,将样品放置在测量光束的路径中,并测量光束通过样品后的强度It。

(2)溶液样品

如图2所示,在测量光束的路径中设置有包含溶剂的单元,并且测量通过单元之后的光束的强度I 0。接下来,将包含通过将样品溶解在溶剂中而产生的溶液的单元放置在测量光束的路径上,并且测量光束通过单元之后的强度。透射率T由等式(1)给出,但对于溶液样品,更常见的是使用由等式(2)给出的吸收率Abs。

表示吸光度Abs和样品浓度C之间关系的方程式(3)被称为“朗伯-比尔定律”。吸光度与浓度之间存在比例关系,这构成了定量分析的基础。

此处,ε是样品的吸收系数,L是样品池的光程长度。
图2所示的测量方法消除了细胞表面反射和溶剂吸收的影响,并确保仅测量由于样品引起的吸收。

通常将单色光用于图1和图2所示的测量光束。单色光是由单个波长组成的光。确切地说,它具有频谱带宽(狭缝宽度)。例如,具有500 nm波长和2 nm光谱带宽的单色光是覆盖499和501 nm的波长间隔(半高全宽)的光。