分光光度计(也称为紫外可见光谱仪)

分光光度计一词可以指相当多种测量光的仪器,其确切定义取决于科学或工业**域。在所有情况下,术语“照片”用于表示光谱仪用于定量测量具有波长的光强度。在学术研究(尤其是化学和生物学实验室)中,分光光度计一词专门用于指测量样品对光的吸收的分光光度计,此处将使用该定义。

基本的单光束分光光度计的程式化布局如图4所示。它包括一个白色光源,通常是覆盖弧度范围的氘弧灯和覆盖可见光的卤素钨灯的组合。或单个氙弧灯覆盖整个范围。然后是激发单色仪,用于选择到达样品的光的波长。然后,该光或者透射通过样品(如图4所示)以用于透明样品(例如溶液),或者从表面反射出去以用于不透明样品。然后使用通常是光电倍增管或硅光电二极管的检测器监测透射或反射光的强度。

除了独立的分光光度计,分光光度计的功能也可以作为其他功能集成到其他分光光度计中。FS5荧光分光光度计就是一个例子,它标配了透射检测器,除了是荧光分光光度计外,还具有单光束分光光度计的所有功能。

在分光光度计中进行的**常见的测量是测量样品的吸收光谱。扫描激发单色仪,将通过样品透射的光强度变化记录在检测器上。然后用参考样品重复此操作,并针对荧光素在磷酸盐缓冲液中的溶液计算吸收光谱,如图5所示。

光谱仪的测量示例:使用FS5光谱荧光计测量的荧光素吸收光谱。

使用FS5荧光分光光度计测量的荧光素吸收光谱。

分光光度计的一种更**的版本是瞬态吸收光谱仪,它可以测量吸收光谱随时间的变化,对于查看通过化学反应或短暂的光激发态产生的临时物质至关重要。