紫外/可见分光光度法中的故障排除

分光光度法是一种广泛应用于各行各业的分析技术,可根据其吸收的光量提供材料反射或透射性质的定量测量。**常用的分光光度计在UV / Vis范围内工作。

分光光度测量中的挑战取决于样品的体积和浓度。在生物研究应用中,UV / Vis分光光度计用于测量来自生物样品的分析物,例如核酸,蛋白质和细胞。这些样品通常体积有限或高度浓缩,这带来了独特的挑战。我们**近甚**看到了仅测量样品滴剂或微量体积的应用的增长。这些样品通常是高浓度的,研究人员在获得测量结果时寻找避免样品稀释的方法。

紫外/可见分光光度法应用中的大多数问题都是由于用户选择了错误的方法或者手头样品的错误比色杯。问题的第二个主要原因是使用了错误的净化策略。在可能的情况下,用户应投资一台优化用于现代生命科学实验室的分光光度计,并遵循以下提示。

低体积与低浓度

为了确定分光光度测量的**佳方法,分析人员**正确识别样品的特征。用户经常将低容量和低浓度混淆,导致数据有问题。Beer-Lambert定律的理解和应用对于建立分光光度分析是有用的,并且在使用生物分子时尤为重要,其中许多生物分子吸收光。比尔 - 朗伯定律将光的吸收与光传播的材料的性质联系起来。物质的浓度与样品本身吸收的光量成正比,与透射光的对数成反比。公式为:A =Ɛxcxd(其中Ɛ=样本特定因子消光系数,c =溶液浓度,d =路径长度)。

样品纯度

样品纯度很重要,不仅在分光光度测量中,而且在量化和其他下游应用中。取决于基质和目标分析物,样品中的污染物可包括蛋白质,缓冲组分或甚**细胞。无论是使用旋转柱还是使用真空歧管的自动化套件解决方案,样品制备策略都应针对您的样品量和浓度进行优化。样品制备试剂盒供应商提供有关选择特定样品的**佳化学和程序的指导和手册,以及防止柱过滤器过载的提示或可能导致不纯的样品洗脱的其他困难。

选择合适的比色皿

比色皿是光学透明的细胞,其将分析物保持在溶液中并用于将样品引入光路中。有两种类型的比色皿 - 紫外线和非紫外线透明的。有些比色皿只能在可见光范围内使用。一定要评估比色杯的状况。如果它被划伤或污染,如果它带有指纹或冷凝,可能会导致测量结果不准确。分光光度计的灵活性各不相同,有些可以容纳比其他更多的比色皿。除了各种标准比色皿外,某些仪器还可以使用特殊的微量测量池,可用于定量分钟。用户还可以找到专门设计用于少量高浓度生物分子的微量比色皿,例如蛋白质和核酸,没有样品稀释。或者可以通过将样品直接移液到专门用于微量体积分析的分光光度计的测量窗口中来量化小样品体积的生物样品。

软件要求

没有人愿意花时间进行仪器培训。在学术界,学生正在进行分析,这可能尤其具有挑战性。方法开发和数据管理可能非常困难,从头开始编程方法会浪费宝贵的实验时间。当今许多复杂的仪器都配备了易于使用的软件; 有些可以直接使用,没有编程培训。

在选择仪器时,评估员工的经验水平以及对专用培训和编程时间的容忍度是一个重要步骤。数据管理和存储也是需要考虑的重要方面。在许多情况下,停电或系统故障可能导致数据丢失。在过去十年中开发的技术可以直接轻松地连接到PC,无需额外的软件或存储设备。

分光光度法将继续成为现代实验室的主力。正如**近的技术进步已经产生了针对生物科学应用而优化的仪器,我们期望不断发展以满足不断变化的需求。我们还希望仪器更容易使用。