选择最佳检测方法:吸光度与荧光

分光光度法是生命科学和临床应用中所有**域中**有用的定量分析方法之一。它为分析蛋白质,核酸和代谢物等各个组分提供了便利的方法。它还可以检测有关解决方案的内容和纯度的详细信息。

甲分光光度计  被设计为测量由特定化合物吸收或反射的光的量,并且在任何研究实验室的重要工具。它通常用于确定溶液中颗粒的浓度。一些分光光度计也可以测量动力学反应。

类似地,分光光度计可具有测量荧光的附加能力。荧光是在一个波长处的光能的分子吸收,并且在另一个更长的波长处几乎是瞬时的再发射。一些分子自然发荧光,其他分子**被修改为发荧光。

分光光度计的常见研究应用包括测定溶液中DNA或蛋白质的浓度,测量酶催化反应的速率和监测细菌细胞的生长曲线。根据研究人员的重点,这些方法中的任何一种都可用于表征感兴趣的样本。

与任何方法一样,每种方法都有优点和缺点。在这里,我们介绍了每种方法的优缺点,供**终用户在选择仪器时考虑。

吸收(UV / Vis)分光光度计

紫外和可见(UV / Vis)光谱仪在过去的35年中一直在使用,是实验室中重要的分析仪器。以下是选择UV / Vis分光光度计时需要考虑的一些功能。

优点

•经济价值:这些仪器具有**的价值,可提供强大的运营和低拥有成本。他们只需要很小的注意力就可以保持平稳运行 监控整体清洁度和灯泡寿命是维护的主要部分。
•易于使用:分光光度计是相当简单的仪器,移动部件很少; 因此它们相对容易使用和维护。此外,许多制造商提供直观的软件解决方案以获得令人满意的用户体验。
•无创:没有直接操作被测材料,因此样品的完整性不会受到影响。
•显示污染物:全谱吸收读数检测到额外的峰,揭示潜在的样品污染物的存在。该信息可用于下游应用,其中污染物可能对实验有害。

缺点

•选择性:请记住,紫外/可见分光光度计不区分感兴趣的样品和在相同波长下吸收的污染物。例如,所有核酸在260nm处或附近显示出峰; 因此,完整的RNA和双链DNA,以及样品溶液中单链DNA的降解物种,有助于260nm处的总吸光度。
•杂散光:分光光度计中使用的探测器是宽带的,这意味着它们会响应到达它们的所有光。如果样品中存在反射光的杂质,则可能记录错误的读数。杂散光还会导致吸光度降低并降低仪器的线性范围。
•样品条件:吸收结果可能受温度,pH,杂质和污染物的影响。所有这些因素都会改变样品的吸收特性,导致读数不准确。
•低灵敏度:在低样品浓度下,分光光度计的灵敏度通常不足。研究人员可能需要集中他们的样本,为他们的工作流程添加额外的步骤和时间。

具有荧光功能的光谱仪

尽管测量荧光可能不像测量吸光度那样常见,但它甚**可能是更有效的样品表征方法。了解此方法的优点和缺点非常重要,因为它适用于不同的应用程序。

优点

•灵敏度:荧光检测的灵敏度约为吸收分光光度法的1,000倍。这导致更大的检测限,同时可能使用更少的样品材料。这在使用珍贵或有限数量的材料时尤为重要。
•特异性:通过此方法仅检测到发荧光的分子,与UV / Vis吸收相比,具有更高的特异性。
•浓度范围广:荧光法通常可以检测超过3到6个对数浓度的浓度,无需样品稀释或样品修改。
•准确的结果:荧光测量的灵敏度和特异性可以提供更**和准确的读数。  

缺点

•经济价值:仪器的价格以及检测试剂对成本敏感的科学家来说可能是一个挑战。光源和滤光片是仪器的**部件,提供灵敏度和选择性检测,但这些选项也会影响购买价格。在评估方法时,应考虑每次检测或甚**每个数据点的价格。
•杂质:虽然荧光计不受浊度影响,但光散射可能会人为地增加测量读数。另一方面,如果干扰物质或杂质吸收光,则可以减少荧光读数。
•气泡:样品制备中的气泡可能导致读数不稳定或波动,因为测量取决于光线清洁地激发样品的分子。
•pH:荧光可能受样品溶液pH值的影响,导致测量结果不准确。使用相同的标准条件,空白和样品有助于消除这种影响。

三个**点

无论是测量核酸,蛋白质浓度还是酶活性,分光光度计都是您的**仪器。在选择**适合您实验室购买的仪器类型时,有许多选择需要考虑。三个重要的考虑因素将指导您为您的研究选择合适的方法和仪器。

1.预期应用和灵活性:虽然所有分光光度计都使用非侵入性方法,但具有额外荧光功能的分光光度计在检测中提供增强的灵敏度和选择性。许多制造商提供购买具有各种功能的各种分光光度计的选项。
2.易用性:在大多数研究实验室中,使用分光光度计的科学家具有不同的经验水平。公司对提供方便,易于交互的直观软件非常敏感。为简单起见,软件可能包含在单元内。该软件可以包括针对常用应用程序和常用套件的编程。技术指南也可能包含在软件中,并逐步说明。此外,USB端口选项可用于导出数据,无需连接到外部计算机。用户在分光光度计上轻松导航协议非常重要。
3.维护和可靠性:虽然分光光度计是相当简单的仪器,运动部件有限,但需要进行一些维护以确保**可靠和准确的测量。监控清洁度和灯泡寿命包括大部分维护; 这样做可以使您的仪器可靠运行。务必检查制造商对部件和人工的保修,并与您的销售代表讨论保修范围内提供的服务选项。

与购买实验室的任何产品一样,购买前一定要做好功课并了解自己的需求。分光光度计是任何研究实验室的宝贵工具。因此,探索您的选择,然后您就可以开始测量了。