选择合适的体积来测量样品

分光光度计  是完全适合测量的感兴趣的物质多少吸收或透射光的特定波长,从而对浓度和纯度屈服信息。典型研究实验室中的分光光度计具有标准尺寸的腔室,其中放置比色皿,允许特定波长的光穿过样品经过规定的距离,称为路径长度。在为样品和应用选择合适的比色杯时,样品类型,体积要求,浓度水平和测量值应影响您的决定。

选择比色杯时,有三个选项需要考虑:

  • 微量比色皿需要的测量体积超过1.5毫升**2毫升。
  • 标准比色皿通常需要50 m l**2 ml 的测量体积。
  • 微体积适配器需要在一个单一的微升范围内的样品,通常为2之间米升和10 米升。

确保所选的比色皿对用于测量目标样品的波长是透明的也很重要。玻璃和聚苯乙烯通常对可见光透明但在紫外光谱中吸收。因此,玻璃和聚苯乙烯适用于比色蛋白质测定或测量细菌培养物的密度,但它们不能用于测定在230,260和280nm的UV范围内的核酸的浓度和纯度。另一方面,石英和其他紫外线兼容塑料在可见光和紫外线范围内通常都是透明的,并且在紫外光光谱中测量样品时是合适的选择。

比色杯和微量体积适配器都有优点和缺点。以下是一些提示,指导您选择合适的容器,以准确可靠地测量样品。

比色皿

分光光度计在两个标准光束路径高度之一(距比色皿底部的距离)进行测量 - 根据仪器的不同,可以是8.5或15 mm。宏观比色皿通常是直壁式的,可用于大多数分光光度计。另一方面,标准比色皿具有相同的外部占地面积,但其内部通常是锥形的,以限制所需的样品材料的量。无论如何,标准比色皿设计用于在腔室中的特定路径高度处通过样品进行测量。**确认您选择用于测量样品的比色杯是否适合仪器的路径高度。以下是比色皿的一些重要特征:

  • 当测量通常在低浓度下发现的样品时 - 例如RNA,单链DNA和寡核苷酸 - 您需要足够长的路径长度才能使读数在仪器的线性测量范围内。标准要求是10毫米,尽管目前市场上的一些比色皿提供可选的路径长度。例如,EppendorfUVette®可以旋转90度,以便在2毫米的路径长度上读数。
  • 如果您计划在测量后恢复样品,**好使用无菌的一次性塑料比色皿。比色皿可以批量购买,但某些应用可能需要单独包装的无菌比色皿,这些比色杯经过认证,不含蛋白质或不含核酸酶。
  • 细菌培养物的浓度通常通过测量波长为600nm的样品的吸光度来确定,通常称为“OD600”。宏观比色皿的较大样品体积允许诸如此类的异质样品以提供更可靠的读。

微量体积适配器

微量体积适配器是一种比色杯形状的测量池,设计用于安装在比色杯室中,并且需要**小的样品体积 - **小1μl和多达10μl,具体取决于适配器。将样品夹在两个光学透明的石英板之间,保持短的固定距离。在微量离心的情况下μCuvetteG1.0,固定距离为1.0毫米,其允许通过样品短路径长度。除了使用少量有时珍贵材料的明显特征外,微体积适配器也是可重复使用的; 在阅读下一个样品之前,他们只需要用无绒纸擦拭即可清洁适配器。考虑微体积适配器的这些附加功能:

  • 在短路径长度上测量小体积比在多个步骤稀释样品更简单快捷。此外,由于移液步骤较少,读数可能更准确。
  • 微量体积适配器的路径长度比比色杯短。在测试高浓度核酸和/或蛋白质与更稀释的样品制剂时,使用微量体积适配器的读数更可靠和准确。
  • 微量体积适配器可重复使用,无需持续补充您的耗材比色杯。对于某些下游应用,例如不需要无菌的那些,可以回收珍贵的未稀释样品。

标准分光光度计  可以容纳各种不同的比色皿,甚**是微量体积适配器。适当的比色皿或微量体积适配器的选择受样品类型,使用的体积,路径长度和比色皿材料的透明度的影响,为科学家提供了可靠和准确地进行实验的灵活性。因此,请查看我们所涵盖的选项,然后设置波长和路径长度并开始测量!