使用OneDrop微取样盘进行CD光谱测量

介绍

随着NMR和X射线晶体学,CD光谱学是蛋白质结构分析不可或缺的测量方法。由于小体积和/或低浓度是CD样品测量的典型要求,因此JASCO开发了一种新型取样技术以满足这些样品要求。

该技术使用单滴微取样盘(MSD),如图1所示。使用One-Drop MSD的CD测量具有以下优点:

  1. 小体积要求:10μL(1 mm路径长度),2μL(0.2 mm路径长度)
  2. 易于处理的MSD:透镜的疏水处理保持样品在盘中心
  3. 可变路径长度:可用于1或0.2 mm路径长度的间隔物
  4. MSD窗口提供无伪影测量
  5. JASCO CD光谱仪使用平行光束,因此不需要对准
  6. 高度可重复的基线

本应用笔记将通过测量四种蛋白质的CD光谱来证明一滴微量取样盘的容易性和效率。

图1.微量取样盘组件(可拆卸单元,2个窗口和间隔件)

实验

钻石评价

为了使用图1所示的微量取样盘,将样品滴到MSD的中心部分。然后将盘组装并夹紧。然后将MSD置于样品架中的垂直位置。

钻石评价

图2.使用微量取样盘的程序图

结果

图3所示的CD光谱比较了使用MSD和常规电池获得的结果。与使用的圆柱形电池(蓝线)相比,微取样盘(绿线)提供近似相同的光谱。数据还显示在260和190nm之间的二级结构可以使用MSD在少于三分钟内测量。

钻石评价

图3.使用微量取样盘(蓝色)和圆柱形细胞(绿色)的(A)血红蛋白,(B)溶菌酶,(C)刀豆蛋白A和(D)胰蛋白酶抑制剂的CD光谱。

结论

本应用笔记表明,单滴微量取样盘是一种易于使用的方法,可为小体积和低浓度样品获得可靠且快速的结果。